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1. 我该如那里置和生涯多肽？
冻干粉形式的多肽，经密封包装可在常温条件下稳固运输，消融状态的多肽不宜恒久生涯。
多肽生涯指南：需要恒久生涯的多肽，应以冻干粉形式存放在含有干燥剂的密封容器内，置于-20°C生涯，-80°C效果更好，可以最大限度地阻止多肽降解。这种贮存方法可以使多肽可生涯数年，阻止了被细菌降解和氧化，也可以阻止二级结构的形成。
翻开包装： 在翻开包装和称重前，请先将多肽在干燥器中平衡至室温。因多肽往往具有吸湿性，未经平衡到室温的多肽在翻开盖子后易凝聚，从而降低了多肽产品的稳固性。
称重： 迅速称取您所需的多肽，并将剩余多肽继续贮保存-20°C或更低温度。与其他多肽相比，含有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和谷氨酸N -最后的多肽生涯期更短。
2. 怎样消融多肽？
多肽的消融性很洪流平上取决于多肽的极性。酸性的卵白消融于碱性溶液，而碱性卵白可消融于酸性溶液，含有大宗不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先消融于少量有机溶剂中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，然后加水（蒸馏水）稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不可用DMSO消融，由于DMSO可能造成侧链氧化。
多肽消融测试： 在多肽消融之前先取小部分举行多肽消融测试，您需要测试几种差别的溶剂，直到找到最适当的一种。超声处置惩罚有助于打碎颗粒并增添消融度。（注重: 超声处置惩罚会引起溶液发热和多肽降解。）
将每个酸性氨基酸赋值为－1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及羧基最后-COOH。每个碱性氨基酸赋值为＋1，包括精氨酸（R）、赖氨酸（K）、组氨酸（H）以及氨基最后-NH2。然后盘算整个多肽的电荷数。
若是整段肽所带电荷是阳性的，说明该肽是碱性的�？上仁笛橛谜袅笏聪�；若是不溶于水，接着实验用少量10%-25%醋酸消融，若是仍然失败的话，添加一些TFA（10-50微升）来增溶，然后用水稀释至理想浓度。
若是整段肽所带电荷是阴性的，说明该肽是酸性的。酸性的多肽可以实验用PBS（PH 7.4）来消融，若是不溶的话，添加少量的碱性溶剂，如0.1 M的碳酸氢铵，然后加水稀释至理想浓度。含有游离半胱氨酸的多肽应溶于脱气的酸性缓冲液中，由于当PH值大于7时，巯基会被迅速氧化成二硫化物。
若是整段肽电荷是零，说明肽是中性的。中性肽通常溶于有机溶剂。首先，实验添加少量乙腈、甲醇或异丙醇。关于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亚砜消融，然后用水稀释至理想浓度。关于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。关于有群集倾向的肽，可添加6M盐酸胍或8M尿素，然后举行须要的稀释。
为了避免或只管镌汰多肽降解，请将多肽以冻干粉形式生涯在-20°C，-80°C更佳。若是需要生涯溶液肽，最好分成小样存放，以阻止重复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的贫困，以是请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。
碱性氨基酸: K, R, H, N-terminus
酸性氨基酸: D, E, C-terminus
极性中性氨基酸: F, I, L, M, V, W, Y
非极性疏水氨基酸: G, A, S, T, C, N, Q, P, 乙�；�，酰胺基
举例说明：
RKDEFILGASRHD: (+5) + (-4) = +1 以为是碱性多肽，见办法2
EKDEFILGASEHR: (+4) + (-5) = -1 以为是酸性多肽，见办法3
AKDEFILGASEHR: (+4) + (-4) = 0 以为是中性多肽，见办法4
3.一个肽段是否可溶能展望吗？
我们无法通过研究多肽的结构来展望其在水中的消融度。然而，赖氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于展望消融度，尤其是短肽。与此相反，含有天门冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的，但易溶于稀氨水或碱性缓冲液。
4. 怎样选择适合自己研究的多肽纯度？
粗品肽不推荐用于生物实验。粗肽可能含有大宗的非肽类杂质，如残留的有机溶剂、扫除剂、TFA和其他不完整肽。TFA不可被完全消除，通常交付的肽以TFA盐的形式保存。若是残留的TFA影响您的实验，我们推荐其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐等。这些盐通常比通例TFA盐贵20-30%以上。这是由于在转化历程中泛起更多的肽损失和需要更多的原质料。
建议对种种项目接纳以下级别的肽纯度：
>70% 肽纯度
肽微阵列
作为制备抗体的抗原
层析法
酶联免疫吸附试验检测抗血清滴度
>80% 肽纯度
免疫印迹法（非定量）
酶底物肽（非定量）
关闭肽（非定量）
亲和纯化
磷酸化检测
卵白电泳的应用和免疫细胞化学
>95% 肽纯度
标准酶联免疫吸附试验和RIA（定量）
受体配体相互作用（定量）
体内、体外
生物学测定
酶的研究和阻断实验（定量）
NMR研究
质谱剖析
其他定量检测
>98% 肽纯度
SAR研究
临床试验
APIs(药物活性因素)
工业品
X-ray晶体研究
其他敏感的实验：酶与底物、受体与配体相互作用、阻断和竞争实验
5. 什么是多肽的纯度？
多肽的纯度是指HPLC要领在214nm处检测到的目的多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长)，紫外分光光度计检测不到水和残留的盐不�？煞⒚髌渌脑又拾ǎ喝笔蛄校ㄈ笔Я艘桓龌蚨喔霭被岵谢陌行蛄校�，截断序列（加帽历程中爆发的序列）脱�；げ煌耆蛄校ū⒂谡龊铣衫袒蜃詈蟮牧呀饫蹋�。
多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会爆发少量的TFA，如：游离的氨基最后和其他侧链如Arg、Lys、His都可天生少量TFA杂质。通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。纵然处于冻干状态，水也会因共价连系的能力差别而差别水平地保存着。
纯化前的多肽中包括的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包括的杂质除了TFA盐，大大都为序列被修改的多肽。
缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列
为阻止缺失序列的爆发而举行的加帽操作，截断序列即爆发于加帽历程中
爆发于整个合成历程或最后的裂解历程
�；せ匦赂阶旁诙嚯牡钠渌恢�
6. 什么是肽净含量？
肽净含量差别于多肽纯度。肽净含量是指与非肽物质（主要为抗衡离子和水）相比的多肽量�？赏ü被崞饰隼慈范木缓�。通常，亲水性多肽纵然在严酷的冻干状态下，也会吸收微量的水。因纯化和冻干工艺，会导致差别批次的肽净含量有所差别。
7. 怎样合成多肽？
差别于自然卵白质的合成，人工合成的偏向是从C到N端。泽溪源的多肽合成是基于PeptideSyn手艺平台的Fmoc或t-Boc法的多肽合成。详细合成由下列几个循环组成：①去�；ぃ篎moc�；さ闹雍偷ヌ灞匦栌胮iperidine去除氨基的�；せ�。②激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化�；罨牡ヌ逵胗卫氲陌被从涣�，形成肽键。③循环：这两步反应重复循环直到合成完成。接着合成的肽从树脂切割和去�；�。最后被沉淀、洗脱、冷冻干燥。
8.What salt form should I use?
Peptides are usually delivered as TFA salts. If residual TFA would be problematic for your experiment, we recommend other salt forms such as acetate and hydrochloride. These salt forms are usually 20-30% more expensive than the regular TFA salt because of the peptide loss that takes place during the salt conversion and the greater amounts of raw materials required.
9. 怎样对合成的多肽举行质检？
公司对客户提供的所有质料均严酷保密。我们总是在发送产品时，同时免费提供HPLC和MS检测效果。公司所有多肽均接纳反相色谱法纯化。以质谱法测定肽的分子量来确定产品是否准确，MS检测效果还可显示大部份的主要杂质。若是须要，还可提供肽净含量检测，如氨基酸剖析或元素剖析。这些要领可以证实多肽的氨基酸组成，他们均可作为多肽确认的增补要领。所有交付的肽均抵达了客户要求的纯度。没有抵达纯度要求的那些多肽均被扬弃。虽然若是客户需要，也可以发送给他们。
10. 公司对合成的多肽提供分装效劳吗？
凭证要求，公司可以将您的部分或所有订单，免费分装成小份。由于少量分装可以阻止多次重复冻融，镌汰容器的开盖和闭合的次数，镌汰处置惩罚不当或细菌污染的时机，让您的多肽越发稳固。
11. 什么是质料药（APIs）、目录肽（catalog peptides）、合成肽（custom peptide synthesis）？
质料药（活性药物因素）是医药中具有药物活性的因素，如缩宫素、恩夫韦地等。目录肽是市场上销售的多肽，他们通常以较高的纯度水平批量生产。合成肽通常是凭证客户的详细要求定制，如特定序列、修饰、差别纯度、差别长度等要求。公司提供的API肽合成周期为2-3周。
12. 单个订单的最少合成量是几多？
公司提供的单条订单的最少合成量是1mg，用于研究的多肽和GMP药物肽合成的量没有上限。
13. 能够合成的多肽的最大长度是几多？
我们乐成合成了长度为120个氨基酸的多肽。 50个氨基酸长度的多肽属于通例合成。
14. 什么是固相合成？
氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被关闭基团�；さ陌被峁布叟诠滔嘣靥迳�。在三氟乙酸的作用下，脱掉氨基的�；せ�，这样第一个氨基酸就接到了固相载体上了。然后氨基被关闭的第二个氨基酸的羧基通过N,Nˊ-二环己基碳二亚胺（DCC，Dicyclohexylcarbodiimide）活化，羧基被DCC活化的第二个氨基酸再与已接在固相载体的第一个氨基酸的氨基反应形成肽键，形成二肽。重复上述肽键形成反应，使肽链从C端向N端延伸，直至抵达所需要的肽链长度。
15. 什么是树脂和链接剂?
树脂是一种以聚苯乙烯等为基质的聚合物支架，是人工合成的固相介质。差别的树脂有差别的特征。如聚乙二醇在非极性溶剂中膨胀，而聚苯乙烯在极性和非极性溶剂中都膨胀。链接剂是链接树脂支架与基质的中心结构。差别的链接剂，适用于基质中的差别功效团。
16. 什么是�；せ�？
�；せ攀悄芄涣倒πЩ挪⒆瓒掀浞从钚缘钠�。有些是acid-labile�；せ�，如Boc和tert-Bu酯类物质。有些是base labile�；せ�，如Fmoc和Fm酯类物质�Ｉ杏幸恍┦莊luoride-labile�；せ�，如Tmsec和Tmse酯类物质。为确保羧基和氨基间的有用耦合，�；せ庞Ω靡子诒桓郊雍腿ケ；�，且不影响其它肽段。
17. 为什么要举行N端乙�；�，C端酰胺化修饰？
化学合成的肽往往携带游离的氨基和游离的羧基。而肽的序列往往代表了母本卵白的序列，为了与母本卵白更为靠近，肽最后往往需要关闭，即N端乙�；虲端酰胺化，这些修饰会镌汰多肽的总电荷，降低多肽的消融度，也可以使肽模拟它在母本卵白中α氨基和羧基的原始状态。
若是需要对N端举行乙�；奘位蚨訡端举行酰胺化修饰，请在下单时明确。合成一旦竣事，则不可再举行修改。
18. 荧光标记时，肽和修饰标记的染料之间需要加一个距离吗？
大都染料属于大分子量芳香族氨基酸，在多肽中引入这一类大型分子，为了阻止多肽与标签之间爆发相互作用，维持卵白的构象及其生物学活性，我们推荐引入一个可弯曲的距离区，好比Ahx, Ahx是一个含有6碳分子的环状结构，可以维持荧光标签的稳固性。不然，FITC很容易连系多肽序列中的半胱氨酸残基或者赖氨酸残基。
通常情形下，生物素、FITC一类的染料既可以标记在卵白的氨基端也可以标记在卵白的羧基端。然而，为了在最短时间内，最便捷又高效地合成多肽，泽溪源推荐客户选择标记在氨基端。由于一个多肽的合成往往是从羧基端最先的，这样一来，氨基端的修饰便成为最后一个环节，不需要再举行特别的结相助用。反之，羧基端修饰需要特另外环节，因此历程越发重大。
19. 怎样盘算多肽的浓度？
Peptide Purity is the percentage target sequence amongst the total quantity of peptides. Because peptide bond formation in synthesis is not 100% efficient, not all polypeptide chains are the target sequence. Some chains may not go to completion, or amino acids may not properly bond on certain chains. These deleted sequences make up a certain percentage of peptides in your mixture. We analyze and purify crude peptides using Reverse Phase HPLC in conjunction with Mass Spec Analysis to attain the desired target sequence purity.
After your peptide is purified and lyophilized, the white peptide powder will contain some non-peptide components such as water, absorbed solvents, counter ions and salts. Net peptide content consists of the actual percentage weight of peptide in your final product. This number varies, anywhere from 50 to 90 percent, depending on the purity, sequence and method of synthesis and purification. When calculating the concentration of peptide solution for biological assays or other sensitive peptide experiments, it is essential that you account for peptide content. Peptide concentrations can be determined by subtracting away the non-peptide weight determining the volume of solvent in which to dissolve. For example, when using 1mg of final product to make a 1mg/ml solution of peptide with a content of 80%, you would use 800ul of solvent instead of 1000ul.
Peptide content is not an indication of peptide purity; these are two measurements. Purity is determined by HPLC and indicates the presence/absence of contaminating peptides with undesired sequences. Net peptide content only gives information on the percent of total peptide versus total non-peptide components independently of the presence of multiple peptides. Net peptide content is accurately found by performing amino acid analysis or UV spectrophotometry.
It is difficult to determine the actual peptide concentration based on the weight of the lyophilized peptide. Lyophilized peptides may contain 10-70% water and salts by weight. More hydrophilic peptides generally contain more bound water and salts compared to hydrophobic peptides.
If the peptide has a chromophore in the sequence (W or Y residues), peptide concentration can be conveniently determined based on the extinction coefficient of these residues.
The following steps can be used for the calculations:
Molar extinction coefficients of chromophoric residues at 280 nm at neutral pH using a 1-cm cell:
Tryptophan 5560 AU/mmole/ml
Tyrosine 1200 AU/mmole/ml
The extinction coefficient of each chromophore in the peptide sequence is generally considered to be additive, that is, the overall molar extinction coefficient of the peptide depends on the types and number of these choromophoric residues in the sequence.
Calculations: mg peptide per ml = (A280 x DF x MW) / e, where A280 is the actual absorbance of the solution at 280 nm in a 1-cm cell, DF is the dilution factor, MW is the molecular weight of the peptide and e is the molar extinction coefficient of each chromophore at 280 nm
Hypothetical example: A 50X diluted solution of a peptide with the sequence GRKKRRQRRRPPQQ (MW = 1847) reads 0.5 AU at 280 nm in a 1-cm cell. To calculate the original peptide concentration in the stock peptide solution:
Mg peptide/ml = (0.5AU x 50 x 1847 mg/mmole) / [(1 x 5560) + (2 x 1200)] AU/mmole/ml = 5.8
Cautions:
Any absorbance calculation assumes that the peptide is unfolded and the chromophores are exposed, which is usually the case in short, soluble peptides. If there are doubts about the solubility or the folding of the peptide, it is advisable to make the measurement under denaturing conditions (e.g., 6M GdnHCl or 8M urea). Obviously, these peptide solutions will be rendered useless, unless the denaturants are removed.
If the sequence does not have Trp or Tyr, the only practical option is to do amino acid analysis.
20. 怎样使用SDS-PAGE法去除小的多肽？
您的样品中是否含有<20 kDa的目的卵白？ 请点击下载关于 用SDS-PAGE法去除小分子合成肽的计划。Tricine-SDS-PAGE计划其中包括考玛斯亮蓝染色和电泳的实验要领。
Tricine-SDS-PAGE被普遍用于疏散分子量为1-100 kDa的卵白，它被以为是区分<30 kDa卵白的首选电泳系统。
21. 怎样将多肽消融在DMSO中？
二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻�；ぜ辆Ｓτ糜谙赴�。在细胞冷冻历程中，DMSO可避免胞内/胞外晶体的形成，其事情浓度为10%。DMSO通�？捎胙位蜓灏茁寻琢�。
疏水性多肽可以很容易地消融在DMSO中。但DMSO可增添细胞的通透性，若多肽消融于DMSO中则会对细胞爆发毒性作用。高浓度的DMSO绝不可应用于细胞作育中。浓度为5%的DMSO即可让细胞膜消融。大大都细胞株可以容忍0.5% DMSO，少允许以容忍1%的浓度，而不体现出严重的细胞毒性。然而原代细胞作育对其更敏感。以是若是是用原代细胞做剂量/反应曲线(可行性)，其浓度应低于0.1%。
关于某些疏水性很是高的多肽，可先实验将其消融在少量的DMSO(30-50ul,100%)中，然后逐步 (一滴一滴地)将其添加到一直搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中，直至理想浓度。若是滴加历程中，肽溶液最先变污浊，说明已经抵达了消融极限。另外，超声波有助于多肽消融。
履历:
对险些所有的细胞来说，浓度为0.1%DMSO是清静的。
普遍被用于细胞作育的DMSO终浓度为0.5%，不会引起细胞毒性。
虽然对部份细胞来说，1%DMSO也不会爆发细胞毒性，但我们推荐0.5%。
也有5%DMSO乐成地应用于某些细胞的案例。
始终坚持终浓度在0.5%，但贮存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。
